Una absorbancia de dos significa que pasa el uno por ciento de la luz

Diluye hasta que la cifra caiga entre 0,1 y 1

A A = 3 el detector compara un haz con una milésima de sí mismo, y cualquier luz parásita, cualquier raya en la cubeta y cualquier mota de polvo aportan más a lo que queda que la propia muestra. A A = 0,05 aparece el problema contrario: la diferencia entre muestra y blanco es menor que la deriva propia del instrumento. La banda utilizable intermedia es donde un espectrofotómetro se gana el sueldo, y entrar en ella es cuestión de elegir la dilución o la cubeta — un camino de 1 mm en vez de 10 divide la lectura por diez sin tocar la muestra, el remedio más rápido cuando el material escasea.

La absortividad pertenece a un compuesto, a una longitud de onda

No es una propiedad de la máquina ni del tubo: es un número para una sustancia, medido a una longitud de onda, en un disolvente, y mover cualquiera de esos tres lo cambia. Citar una absortividad sin la longitud de onda es como citar una velocidad sin dirección — la cifra es real y la frase está incompleta. También por eso un espectrofotómetro se ajusta a una longitud de onda concreta antes de medir nada, normalmente el máximo de absorción del compuesto, donde la lectura es mayor y menos sensible a un ligero descuadre del aparato. Un desplazamiento de pocos nanómetros cerca de un flanco escarpado del espectro puede mover la respuesta más que todo el error de dilución.

Preguntas frecuentes

¿Para qué sirve realmente el blanco?

Para restar todo lo que no es aquello que mides. El disolvente absorbe un poco, las paredes de la cubeta reflejan un poco, y la lámpara no brilla igual en todas las longitudes de onda; poner a cero sobre una cubeta con todo salvo el analito elimina las tres cosas de una vez. Un blanco hecho con otro lote de disolvente, o pasado en una cubeta distinta de la de la muestra, reintroduce en silencio lo que debía quitar — de ahí que existan cubetas emparejadas y que el blanco se vuelva a medir cada vez que cambia la longitud de onda.

¿Por qué falla la ley a concentración alta?

Por dos razones a la vez, una del instrumento y otra de la química. La instrumental es la luz parásita, que impone un techo a cualquier lectura: en cuanto la transmisión real cae por debajo de la luz que se cuela alrededor de la muestra, subir la concentración ya no cambia nada. La química es que las moléculas apretadas dejan de comportarse de forma independiente — interactúan, se asocian, se desplazan mutuamente la absorción — así que la absortividad constante en micromolar ya no es el mismo número en milimolar. Ambas doblan la curva de calibración hacia abajo, y por eso se traza una recta patrón sobre el rango realmente usado en vez de extrapolarla de un solo punto.