Une absorbance de deux signifie qu'un pour cent de la lumière passe

Dilue jusqu'à ce que le nombre tombe entre 0,1 et 1

À A = 3, le détecteur compare un faisceau à un millième de lui-même, et la moindre lumière parasite, la moindre rayure de cuve et le moindre grain de poussière pèsent davantage dans ce qui reste que l'échantillon lui-même. À A = 0,05, c'est le problème inverse : l'écart entre échantillon et blanc est plus petit que la dérive propre de l'appareil. La bande utile entre les deux est celle où un spectrophotomètre gagne sa vie, et y entrer relève du choix de la dilution ou de la cuve — un trajet de 1 mm au lieu de 10 divise la lecture par dix sans toucher à l'échantillon, remède le plus rapide quand la matière est rare.

L'absorptivité appartient à un composé, à une longueur d'onde

Ce n'est ni une propriété de l'appareil ni de la cuve : c'est un nombre pour une substance, mesuré à une longueur d'onde, dans un solvant, et bouger l'un de ces trois le change. Citer une absorptivité sans la longueur d'onde revient à citer une vitesse sans direction — le chiffre est réel et la phrase est incomplète. C'est aussi pourquoi un spectrophotomètre est réglé sur une longueur d'onde précise avant toute mesure, généralement le maximum d'absorption du composé, là où la lecture est la plus grande et la moins sensible à un léger décalage de l'appareil. Un déplacement de quelques nanomètres près d'un flanc raide du spectre peut déplacer la réponse davantage que toute l'erreur de dilution.

Questions fréquentes

À quoi sert vraiment le blanc ?

À retrancher tout ce qui n'est pas ce que tu mesures. Le solvant absorbe un peu, les parois de la cuve réfléchissent un peu, et la lampe n'a pas le même éclat à toutes les longueurs d'onde ; mettre à zéro sur une cuve contenant tout sauf l'analyte supprime les trois d'un coup. Un blanc préparé avec un autre lot de solvant, ou passé dans une autre cuve que l'échantillon, réintroduit discrètement ce qu'il devait retirer — d'où l'existence des cuves appariées et la reprise du blanc à chaque changement de longueur d'onde.

Pourquoi la loi échoue-t-elle à forte concentration ?

Pour deux raisons à la fois, l'une instrumentale et l'autre chimique. L'instrumentale est la lumière parasite, qui pose un plafond à toute lecture : dès que la transmission réelle passe sous la lumière qui fuit autour de l'échantillon, augmenter la concentration ne change plus rien. La chimique est que des molécules serrées cessent de se comporter indépendamment — elles interagissent, s'associent, décalent mutuellement leur absorption — si bien que l'absorptivité constante au micromolaire n'est plus le même nombre au millimolaire. Les deux font ployer la courbe d'étalonnage vers le bas, raison pour laquelle on trace une gamme sur la plage réellement utilisée au lieu de l'extrapoler d'un seul point.