Uma absorvância de dois significa que passa um por cento da luz

Dilui até o número cair entre 0,1 e 1

A A = 3 o detetor compara um feixe com um milésimo de si próprio, e qualquer luz parasita, qualquer risco na cuvete e qualquer grão de pó pesam mais no que resta do que a própria amostra. A A = 0,05 surge o problema inverso: a diferença entre amostra e branco é menor do que a deriva própria do aparelho. A faixa utilizável entre os dois é onde um espectrofotómetro ganha o seu sustento, e entrar nela é questão de escolher a diluição ou a cuvete — um percurso de 1 mm em vez de 10 divide a leitura por dez sem tocar na amostra, o remédio mais rápido quando o material escasseia.

A absortividade pertence a um composto, a um comprimento de onda

Não é uma propriedade da máquina nem do tubo: é um número para uma substância, medido a um comprimento de onda, num solvente, e mexer em qualquer um dos três muda-o. Citar uma absortividade sem o comprimento de onda é como citar uma velocidade sem direção — o número é real e a frase está incompleta. É também por isso que um espectrofotómetro é acertado num comprimento de onda concreto antes de medir seja o que for, normalmente o máximo de absorção do composto, onde a leitura é maior e menos sensível a um ligeiro desacerto do aparelho. Um deslocamento de poucos nanómetros perto de um flanco íngreme do espetro pode mover a resposta mais do que todo o erro de diluição.

Perguntas frequentes

Para que serve realmente o branco?

Para subtrair tudo o que não é aquilo que mede. O solvente absorve um pouco, as paredes da cuvete refletem um pouco, e a lâmpada não brilha igual em todos os comprimentos de onda; zerar numa cuvete com tudo menos o analito elimina as três coisas de uma vez. Um branco feito com outro lote de solvente, ou passado numa cuvete diferente da da amostra, reintroduz em silêncio o que devia retirar — daí existirem cuvetes emparelhadas e o branco ser remedido sempre que muda o comprimento de onda.

Porque falha a lei a concentração alta?

Por duas razões ao mesmo tempo, uma do instrumento e outra da química. A instrumental é a luz parasita, que impõe um teto a qualquer leitura: assim que a transmissão real cai abaixo da luz que se infiltra em torno da amostra, aumentar a concentração já nada muda. A química é que moléculas apertadas deixam de se comportar de forma independente — interagem, associam-se, deslocam mutuamente a absorção — pelo que a absortividade constante em micromolar já não é o mesmo número em milimolar. Ambas dobram a curva de calibração para baixo, e é por isso que se traça uma reta padrão sobre a gama realmente usada em vez de a extrapolar de um único ponto.